4 grunde til kontaminering under PCR-eksperimenter

Jan 26, 2022 Læg en besked

På grund af udbruddet af den nye coronavirus er opbygningen af ​​PCR-genamplifikationslaboratorier forskellige steder gradvist accelereret. Påvisning af viral nukleinsyre er en vigtig standard for diagnosticering af ny koronar pneumoni. PCR-laboratorium, også kendt som genamplifikationslaboratorium, anvender molekylærbiologisk teknologi. Ved at amplificere nukleinsyrefragmenter kan det også betragtes som en speciel nukleinsyrereplikation in vitro. Gensporingssystemet bruges til at forstå virusindholdet i den menneskelige krop, og detektionsnøjagtigheden kan nå nanometerniveauet. Ny coronavirus-nukleinsyredetektion hører også til denne kategori af teknologi og er en vigtig standard for diagnosticering af ny koronar lungebetændelse.

PCR-genamplifikationslaboratoriet amplificerer hovedsageligt detektionsnukleinsyreskabelonen. Det kan ses, at krydskontaminering med størst sandsynlighed vil forekomme i laboratoriet, hvilket resulterer i falske positive resultater i testprøver. Derfor har PCR-laboratorier strenge designkrav og standarder.

Nu er PCR-teknologi blevet brugt i vid udstrækning inden for infektionssygdomme, tumormålretning, reproduktiv genetik osv. På grund af den multiple og store amplifikation af nukleinsyren, der skal testes med denne teknologi, kan selv en meget lille mængde kontaminering dog let føre til anden, PCR De tekniske krav er relativt høje, og den eksperimentelle proces er kompliceret. Hvis der er udeladelser i de mellemliggende links, kan der opstå falske negative resultater.

1. Det er kontamineringen af ​​PCR-amplifikationsprodukter. Det er også den mest almindelige årsag til forurening. Efter gentagen amplifikation af PCR-produkter overstiger mængden af ​​replikation langt påvisningsgrænsen for PCR, så selv en meget lille mængde kontaminering er nok til at forårsage falske positive resultater i forsøgsresultater.

2. Reagenskontamination. Under reagensfremstilling kan kontakt med kontaminerede beholdere, pipetter, pipettespidser, opløsninger osv. føre til kontaminering af reagenser.

3. Prøven, der skal testes, er kontamineret. Beholderen, hvori prøven er anbragt, er kontamineret, eller prøven er kontamineret på grund af den dårlige forsegling af beholderen; for det andet vil brugen af ​​kontaminerede pipetter eller pipettespidser under nukleinsyreekstraktionsprocessen føre til kontaminering af prøven; desuden indeholder nogle prøver vira. Hvis de spredes ud i luften, kan krydskontaminering forekomme.

4. Aerosolforurening. Hvis aerosolen indeholder vira og andre forurenende stoffer og spredes til luften, er det meget sandsynligt, at det forårsager PCR-produktkontamination. Aerosoler dannes ved friktion mellem luft og overfladen af ​​en væske. Åbning af låget, rystning af reaktionsrøret og gentagne gange aspiration af kontamineringsprøvetageren kan danne aerosoler, der kan føre til krydskontaminering. Efter beregning kan en aerosolpartikel indeholde 48,000 dele, så der skal lægges særlig vægt på forureningen forårsaget af aerosol. Så længe PCR-laboratoriet er kontamineret, er den tidligere resultatrapport ugyldig, og andre eksperimentelle operationer kan ikke udføres. Kilden til kontaminering skal identificeres og fjernes grundigt for at opnå nøjagtige og effektive forsøgsresultater.