pattedyrs cellekulturproces
Pattedyrsceller gennemgår processen med vævsekstraktion, primær kultur og subkultur. Subkultur kan opdeles i cellelinjekultur og cellelinjekultur i henhold til betingelserne. Hver proces er kort beskrevet som følger:
Primærkultur: Efter at væv er fjernet fra dyret, hakkes det, behandles med forskellige enzymer (normalt trypsin), chelateringsmidler (normalt EDTA) og mekaniske metoder (gentagen aspiration og pipetteblæsning) og spredes derefter i individuelle celler, dyrkes i et passende medium, der gør celler i stand til at overleve, vokse og formere sig. Primær cellekultur refererer generelt til cellekultur inden for 10 passager efter celler er fjernet fra et dyr.
Efter primær cellekultur, celledeling og reproduktion øges kulturen gradvist, væksten fylder kulturrummet og kommer derefter i kontakt med hinanden, hvilket resulterer i kontakthæmning, og væksthastigheden aftager gradvist eller endda stopper. Det skal gensåes i nye kulturkolber til subkultur.
Passage (passage): De primære celler tages ud af dyrkningskolben, cellesuspensionen fremstilles og deles i to eller flere dyrkningskolber til videre dyrkning, hvilket kaldes subkultur.
Cellelinje: En cellelinje er en cellelinje efter den første passage i primær kultur. Hvis overlevelsestiden for en cellelinje er begrænset, kaldes den en finit cellelinje. En cellelinje, der opnår ubegrænset reproduktionskapacitet og fortsætter med at overleve, kaldes en kontinuerlig cellelinje eller en uendelig cellelinje.
Cellelinje: Fra de biologisk identificerede cellelinjer kaldes cellepopulationen dannet ved enkeltcelleisolering, kultur eller screening cellelinje. Cellepopulationer af forskellige former isoleres derefter og dyrkes fra den primære cellelinje for at danne subkloner.
Pattedyrcellekulturbetingelser
Forskellige pattedyrceller kræver grundlæggende dyrkningsbetingelser på hvert trin
1. Sterilt og ikke-giftigt miljø: aseptisk behandling af dyrkningsmediet og alt dyrkningsudstyr; tilsætning af antibiotika til dyrkningsmediet for at forhindre kontaminering under dyrkningsprocessen; regelmæssig udskiftning af dyrkningsmediet for at fjerne metabolitter for at forhindre beskadigelse af de dyrkede celler.
2. Ernæring: Flydende syntetisk medium indeholder sukkerarter, aminosyrer, vækstfremmende faktorer, vand, uorganiske salte, sporstoffer osv. Det er normalt nødvendigt at tilsætte naturlige komponenter som plasma og serum
3. Egnet temperatur og pH-værdi: Den optimale temperatur for humane og pattedyrsceller er 36±0,5 grader. Den passende pH-værdi er 7.2-7.4.
4. Gasmiljø: Gasmiljøet er generelt "95 procent luft plus 5 procent kuldioxid" blandet gas. Ilt er en gas, der er nødvendig for cellulær metabolisme, og kuldioxid opretholder mediets pH.
