Som vi alle ved, kan de typer af celler, der dyrkes i laboratoriet, groft opdeles i to typer: adhærente celler og suspensionsceller, og der findes kun få typer celler i begge stater.
Suspensionsceller refererer til en type celler, der kan vokse i en suspenderet tilstand i et medium uden at være afhængig af understøtninger, såsom lymfocytter og de fleste blodsystem-afledte celler. (såsom museleukæmiceller WEHI-3, humane leukæmiceller K-562, HL-60). I industrien er flere og flere klæbende celler blevet tæmmet og dyrket i fuld suspension. På nuværende tidspunkt anvendes SP2/0-, NS0-, CHO-, BHK- og HEK293-celler hovedsageligt i industrien, og de bruges hovedsageligt til rekombinant proteinproduktion; de passageceller, der almindeligvis anvendes i veterinærbiologiske produkter, omfatter hovedsagelig BHK21-celler dyrket i fuld suspension, MDCK-celler; og Vero-celler, PK-celler, ST-celler, Marc145-celler osv. ved hjælp af mikrobærersuspensionskultur har hver celle forskellige karakteristika.
Suspensionsceller
Suspensionsceller "thp-1" 200x
Generelt er suspensionsceller lettere at håndtere end adhærente celler, fordi der ikke kræves trypsinisering til passage af suspensionsceller. Men det betyder ikke, at suspensionsceller er nemmere at dyrke end klæbende celler. For nybegyndere er det mere udfordrende. Der er altid forskellige problemer: for eksempel hvorfor opstår døde celler og celledifferentiering altid; der er enighed om, at passagen er let, men resultatet bliver differentiering; problemer opstår igen efter kryokonservering og genopretning!
Lad os derefter diskutere nogle nøglepunkter om dyrkning af suspensionsceller ~
Punkt 1: Nok tålmodighed, det er meget nødvendigt
Mange suspensionsceller har relativt dårlig levedygtighed, når de netop er genvundet fra kryokonservering. På dette tidspunkt skal vi være tålmodige nok til at vente på, at cellerne fuldfører deres selvreparation og går ind i den logaritmiske vækstfase. For eksempel har THP-1 (human monocytær leukæmi) ofte brug for 7-10 dages restitutionsperiode fra optøning til normal spredning; Jurkat, Clone E6-1 (humane T-lymfocytiske leukæmiceller) har også brug for 5-7 dage efter bedring. Vend tilbage til tilstanden før frysning. Nybegyndere kan opgive træning i denne periode, så vær mere tålmodig! At dyrke sådanne celler er også en proces med at dyrke tålmodighed!
Punkt 2: Tag fat i inokulationstætheden
Generelt bør tætheden af suspensionsceller ikke være lavere end 500,000/ML. Mange suspensionsceller er tæthedsafhængige, og ikke-spredning forårsaget af lav tæthed er også et af de almindelige problemer for nybegyndere. Selvfølgelig er der meget få celler, hvis tilstand bliver værre, når tætheden er høj, såsom W6/32 (mus B-celle hybridomceller). Derfor er det meget vigtigt at søge efter relevant information for at forstå cellernes egenskaber, før man dyrker ukendte celler. Kun ved at kende dig selv og fjenden kan du vinde alle kampe!
Hyppigheden af medieudskiftning bør ikke begrænses til "klart". Celler er levende ting. Under en kontinuerlig dyrkningscyklus kan specifikke næringsstoffer såsom supplerende medium og glucose tilsættes flere gange afhængigt af cellernes vækststatus for at opretholde en god vækststatus for cellerne. . Under suspensionskulturprocessen, med spredningen af celler, forbruget af næringsstoffer i det oprindelige medium og stigningen af metabolitter, vil cellernes levedygtighed falde, og rettidigt tilskud af næringsstoffer vil gøre cellerne i et relativt godt livsmiljø. Jeg vil ikke gå i detaljer her, og undgå hyppig centrifugering og væskeudskiftning.
Lad os tale om væskeudskiftningsmetoden:
①Centrifugal fuld væskeudvekslingsmetode
Det vil sige, fjern alt det gamle medium ved centrifugering (800-1000rpm, 5min), og erstat med frisk medium. Denne metode er velegnet til medium erstatning af "skin solid" godt hævede suspensionsceller (såsom K562), eller den nuværende situation, hvor cellerne er i god stand og tætheden er høj, hvilket resulterer i et stort forbrug af medium. Fordelen ved denne metode er, at mediet skiftes grundigt, og nogle cellerester kan fjernes, men det vil også forårsage en vis grad af mekanisk skade på cellerne.
②Centrifugal halvbyttemetode
Det vil sige, ved at centrifugere (800-1000rpm, 5min) 50 procent cellesuspension, erstatte 50 procent volumen af frisk medium. Denne metode er velegnet til at sammenligne "hykleriske" celler, der er svære at dyrke (såsom thp-1), eller situationen, hvor tætheden er lav, men mere affald skal fjernes i justeringstilstanden.
③ Sedimentationsvæskeudvekslingsmetode
Det vil sige, at i stedet for at bruge en centrifuge, bruges metoden med naturlig sedimentation ved hjælp af tyngdekraften til at adskille mediet fra cellerne for at erstatte hele eller dele af det friske medium. Det har dog anvendelsesbegrænsninger - det er kun egnet til celler, der kan danne celleklynger af en vis størrelse (ellers kan de ikke sætte sig naturligt og kan kun centrifugeres ved lav hastighed), især når det drejer sig om celler, der er afhængige af celleaggregering for at proliferere , såsom NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Denne metode kan minimere den mekaniske skade forårsaget af centrifugeringsprocessen under væskeudvekslingsprocessen, samtidig med at den aggregerede cellemasse bevares, og fjernelse af cellerester er relativt grundig.
Efter at have mestret ovenstående punkter, plus et godt cellefrø, er det lige om hjørnet at dyrke "smukke" suspensionsceller!
cellekulturplade
Yongyue Medicals U-formede cellekulturplade bruges for det meste til dyrkning af suspensionsceller ved hjælp af polystyren af medicinsk kvalitet (PS), produceret i et 100,000- rensningsværksted, steriliseret ved bestråling, fri for DNase, RNase og pyrogen -gratis, Sikkerhed og miljøbeskyttelse.
Cellekulturplader er tilgængelige i forskellige specifikationer for at imødekomme behovene for forskellige bakteriekulturer. Produkttyperne er opdelt i 6-godt, 12-godt, 24-godt, 48-godt, 96-godt, og 384-godt, af hvilken 96-brønd er opdelt i fladbund, U-bund, V-bund; U-formede kulturplader bruges mest til dyrkning af suspensionsceller; V-formede kulturplader bruges mest til immunologiske hæmagglutinationsforsøg.