Som man siger, hvis en arbejder vil gøre et godt stykke arbejde, skal han først skærpe sine værktøjer. Valget af forbrugsstoffer er meget vigtigt for at opnå tilfredsstillende PCR-eksperimentresultater. Ved analyse af PCR-resultater fokuserer vi ofte på analyse af primere, enzymkoncentration, temperatur og tid, men ser bort fra, at PCR-forbrugsstoffer også er en af de påvirkende faktorer. Der findes mange typer PCR-forbrugsstoffer, hvordan vælger man de rigtige PCR-forbrugsstoffer? Her er et par spørgsmål, der hjælper dig med at finde dit svar.
pcr forbrugsstoffer
1. Hvorfor er PCR-forbrugsstoffer generelt lavet af PP?
Uanset om det er almindelig PCR eller real-time fluorescens kvantitativ PCR (qPCR), vil dets forbrugsstoffer normalt være i direkte kontakt med reagenser eller prøver, så materialer af høj kvalitet og gode forarbejdningsteknikker er påkrævet i produktionen og forberedelsesprocessen. Generelle forbrugsvarer er lavet af polypropylen (PP). Polypropylen (PP) er et biologisk inert materiale, overfladen er ikke let at klæbe til biomolekyler og har god kemisk resistens og temperaturtolerance.
2. Hvordan vælger man PCR rør/plader med forskelligt volumen?
Almindelige volumener for PCR-rør/-plader:
• Enkeltrør/{{0}}rør/12-rør: 0.5mL, 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}brøndplade: 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}brøndplade: 0,02mL
Specifikationer for PCR rør/plader:
Vælg det passende produkt i henhold til de specifikke eksperimentelle krav. Volumenet af de fleste PCR-rør kan opfylde kravene til PCR-reaktioner. Kapacitetsspecifikationerne er tilgængelige i standardkapacitet og lav kapacitet. Generelt anbefales det først at vælge lavkapacitetsrør. Fordi reaktorrør/plader med lavt volumen har mindre frihøjde, forbedres varmeoverførslen, og fordampningen reduceres. Samtidig er det nødvendigt at undgå at tilføje for meget eller for lidt prøve ved tilsætning af prøver. For meget kan føre til nedsat varmeledningsevne, spild og krydskontaminering, mens for lidt kan forårsage tab af prøvefordampning.
3. Hvad er forskellen mellem det flade dæksel/konvekse dæksel på enkeltrør eller 8-rækkerør?
Når prøvevolumenet er lille, foretrækkes enkeltrør eller {{0}}rør. Men når behovet for reaktionsvolumen er stort, råder enkeltrør, og volumenet kan nå 0,5 ml. Der er to typer enkeltrør og 8-rør med fladt dæksel og konveks dæksel, hver har sine egne fordele. Flad hætte giver præcis fluorescerende signallevering til qPCR; let at skrive på markører. Det konvekse dæksel er i kontakt med PCR-instrumentets dæksel for at reducere rørdeformation forårsaget af tryk; det vil dog påvirke transmissionen af fluorescerende signaler og kan ikke anvendes til qPCR-eksperimenter.
4. Hvad er forskellene i brugsscenarierne for forskellige 96-brøndplader?
96-brøndplader er generelt opdelt i plader uden skørter, plader med halvskørter og plader med fuld skørt.
Skørtløse plader: Kompatibel med de fleste termiske cyklere eller qPCR-maskiner, men ikke egnet til automatiserede applikationer. Stabiliteten er ikke høj under pipetteringsprocessen, og den skal bruges med en pladeholder.
Halvskørtsplade: Den kan tilpasses til at mærke eller påføre stregkode og automatisk påføring og har god pipeteringsstabilitet.
Fuld skørtplade: meget velegnet til automatiserede laboratorieapplikationer, men også velegnet til etiketter og stregkodeapplikationer. God mekanisk styrke, velegnet til PCR-maskiner med fremspringende moduler, og høj stabilitet under pipettering.
5. Er PCR-pladen/rørmaterialet tykkere og mere stabilt?
ingen. PCR-forbrugsvarer skal have en ensartet vægtykkelse for at give ensartet varmeoverførsel. Den ultratynde rørvæg er 50 procent tyndere end standardversionen, hvilket yderligere kan reducere den termiske barriere, hvilket resulterer i hurtigere og bedre respons.
6. For 96-brønd- eller 384-brøndplader, hvorfor er de afskårne hjørner og etiketter ikke de samme?
Hjørneskæring: Valget af hjørneskæringspositionen for PCR-pladen afhænger af kravene til det tilpassede instrument for nem positionering.
Identifikation: Alfanumeriske markeringer på PCR-plader hjælper med at identificere individuelle brønde og prøveplaceringer. Generelt er det et hævet farvenummerlogo eller et indgraveret logo. Til nogle automatiserede påføringsforsøg vil reaktionspladen med påtrykte mærker være bedre forseglet.
7. Nogle PCR-pladebrønde stikker ud, mens andre er flade. Hvilken er bedst?
Hvad der er egnet er godt. Almindelige PCR-plader har to typer: flade brøndkanter og hævede brøndkanter. Reaktionsplade med flad brøndkant, velegnet til de fleste termocyklister. Reaktionspladen på kanten af stigrørshullet er praktisk til forsegling, hvilket kan reducere risikoen for krydskontaminering mellem prøver.
8. Hvordan vælger man PCR-rør/plader i forskellige farver?
Til almindelige PCR-reaktioner kan der anvendes transparente. I real-time PCR-reaktionen er følsomheden og konsistensen af det hvide rør relativt højere. De hvide rørvægge forhindrer fluorescens i at passere gennem rørvæggene og brydning, hvorved fluorescensen forhindres i at passere til varmemodulet, absorberes af modulet eller reflekteres inkonsekvent. Sammenlignet med gennemsigtige rør kan stærkere og mere fokuserede fluorescenssignaler opsamles i toppen af hvide rør.
