Vores operationsmetoder, detaljer og teoretiske forklaringer bliver retningslinjerne for din operation, såsom placering af næringsopløsninger og celleflasker; steriliseringsprocedurer; For at lære deres korrekte drift er det nødvendigt at være opmærksom på dem første gang.
Plejer celler som at opdrage børn
Celler er virkelig skrøbelige. Det er bedst at tjekke det hver dag for at forhindre unormale fænomener som mangel på vand, kuldioxid, strømsvigt og utilstrækkelig temperatur i inkubatoren. Det er også nødvendigt at løse disse ulykker i tide for at undgå større smerte forårsaget af gentagne forsøg. .
Gode celler bør sås i tide
Celler passeres i batches, så selv hvis en batch fejler, er der en reserve. Det er måske ikke let for den gennemsnitlige person som sidstnævnte. Men dette er læren af mit blod. Da cellerne var forurenet, blev hele hæren udslettet. På det tidspunkt fortryder jeg, at jeg ikke beskyttede frøet.
Hver celle har sine egne karakteristika og bør behandles forskelligt.
Celler er de samme som mennesker, og forskellige celler har forskellige kulturkarakteristika. Vær forsigtig i dyrkningsprocessen. Forskellige cellelinjer bruger forskellige medier og serum.
For eksempel er de glatte muskelceller, jeg rejser, meget aktive og kan lide at være livlige. Om 2-3 dage vil der være en stor befolkning, og jeg kan ikke lide at spise og drikke særlig meget. Det er virkelig det bedste barn at opdrage. Endotelceller og glatte muskelceller har lignende personligheder, men de er meget uhygiejniske og sjuskede. Der er mange sekretoriske celler i dem, så de skal skiftes og vaskes ofte. RAW264.7-cellerne er også meget muntre og meget spiselige. Det er nødvendigt at fodre dem ofte. Hovedpinen er, at cellerne let aktiveres. Det er godt, at flasken og miljøet, som de dyrkes i, er fri for endotoksiner, men det er svært for mig som mor at stille dem tilfreds.
Forberedelse til arbejde før træning
Herunder håndtering af forbrugsvarer, konfiguration af reagenser, sterilitetstest mv.
Rengøring af glas. Til glasvarer (celleflaske, flaske indeholdende næringsopløsning, lille penicillinflaske osv.), skal du først bruge vaskepulver til at rengøre (vær opmærksom på døde hjørner), og skyl derefter. Læg i blød i syreopløsning i mere end 24 timer, og skyl derefter med rent vand 10 gange for at fjerne resterende syreopløsning. Flasker osv. rystes kraftigt under skylningen. Blød derefter i dobbeltdestilleret vand i 24 timer. Efter tørring skal du pakke det ind og tørre det ved 160 grader i 2 timer.
Reagenskonfiguration. Som væske til cellekultur kan der generelt bruges mere end dobbeltdestilleret vand. Og vær opmærksom på justeringen af pH-værdien.
Sterilitetstest. Brug primært filtersterilisering: såsom trypsin, antibiotika, G-418-opløsning, forskellige medier, natriumpyruvat, glutamin osv. Nogle kan autoklaveres: PBS, D-Hank'er osv.
Reagenser opbevares i alikvoter
Herunder næringsopløsning, pancreatin, serum mv.
Serum er især vigtigt. Serum skal opbevares ved -20 grad. Hvis én flaske ikke kan bruges op ad gangen, kan 40-50ml dispenseres i sterile syrebehandlede flasker eller endda opbevares i penicillinflasker. Generelt er serumet leveret af producenten sterilt og kræver ikke sterilfiltrering. Hvis der findes meget suspenderet stof i serummet, kan serummet tilsættes mediet og filtreres sammen, og serummet bør ikke filtreres direkte. (Ingen effekt på cellekultur under normale omstændigheder)
Flaskeserumet skal optøs gradvist: 4 graders køleskab er helt opløst og deles derefter i emballage. Under opløsningsprocessen skal den rystes regelmæssigt (pas på ikke at forårsage luftbobler) for at gøre temperaturen og sammensætningen ensartet og reducere forekomsten af nedbør. Optø ikke direkte fra -20 grader til 37 grader, da temperaturen ændrer sig for meget, hvilket let kan forårsage proteinkoagulering og udfældning.
Varmeinaktivering refererer til opvarmning af det fuldt optøede serum ved 56 grader i 30 minutter. Efter vandbadet er steget til 56 grader, læg serumet i, vent til temperaturen stiger til 56 grader og tæl tiden, ryst det generelt jævnt en gang hvert 5. minut eller deromkring. Formålet med denne varmebehandling er at deaktivere komplementkomponenterne i serumet. Medmindre det er nødvendigt, udføres denne varmebehandling generelt ikke, fordi den vil forårsage en betydelig stigning i sediment og påvirke serumets kvalitet. Vær opmærksom på effekten af at ændre serum (inklusive forskellige batches) på cellerne.
Stærk følelse af sterilitet
Før eksperimentet blev den ultra-rene bænk steriliseret ved UV-lysbestråling i 30 minutter, den aseptiske operations overflade blev aftørret med 70 procent ethanol, og den ultra-rene bænkblæser blev tændt i et par minutter, før den eksperimentelle operation blev startet .
For at lære mere om laboratoriecellekultur, klik venligst: http://www.shjasw.com/