Cellekulturmediet er næringsgrundlaget for kunstig efterligning af dyrecellers in vivo vækstmiljø og opretholdelse af overlevelse og proliferation af celler in vitro. et næringsstof. Så hvad er de almindelige problemer, man støder på i brugen af cellekulturmedium? Lad os lave en analyse.
1. Valg af buffersystem og pH-ændring af cellekulturmedium
Da den optimale pH-værdi for de fleste celler er mellem 7.0 og 7.4, kan afvigelser fra dette interval have skadelige virkninger på cellevækst. Imidlertid er pH-kravene for forskellige celler ikke helt de samme. Primære dyrkede celler har generelt dårlig tolerance over for pH-udsving, mens uendelige cellelinjer har stærk tolerance. Derfor er buffersystemet i dyrkningsmediet vigtigere i den primære kultur. Det generelle cellekulturmedium bruger et afbalanceret saltsystem, men forskellige dyrkningsmedier eller den samme serie af dyrkningsmedier bruger forskellige afbalancerede saltsystemer. For eksempel har 199-serien og MEM-serien alle Hanks' systemkulturmedium og Earles systemkultur. grundlag. Nogle medier er ikke det ovennævnte konventionelle balancerede saltsystem, såsom RPMI1640 medium, F12 medium. Det afbalancerede saltsystem i MEM lavserummediet er heller ikke et konventionelt balanceret saltsystem, og bufferkapaciteten af det balancerede saltsystem er stærkere end det konventionelle balancerede saltsystem.
cellekultur
Der er mange årsager til pH-fald under cellekultur. Når cellerne vokser meget hurtigt, falder pH-værdien normalt hurtigt, hvilket kan løses ved rettidig passage, øge passageforholdet eller reducere serumvolumenet. Derudover kan overspænding af dyrkningsflaskens låg, utilstrækkelig bufferkapacitet i NaHCO3-buffersystemet, forkert saltkoncentration i dyrkningsmediet, bakterie-, gær- eller svampekontamination også få pH til at falde ofte hurtigt. På nuværende tidspunkt kan du løse det på følgende måder:
1) Øg NaHCO3-koncentrationen i dyrkningsmediet eller reducer CO2-koncentrationen i inkubatoren. Når NaHCO3-indholdet er mellem 2,0 g/L og 3,7 g/L, er den tilsvarende CO2-koncentration 5~10 procent;
2) Skift til et CO2-uafhængigt dyrkningsmedium;
3) Løsn flaskehætten korrekt. Tilføj HEPES-buffer til dyrkningsmediet for at opnå den endelige koncentration 10-25 mM;
4) Brug kulturopløsningen baseret på Earles salt i CO2 kulturmiljøet, og brug kulturopløsningen fremstillet af Hanks salt i det atmosfæriske kulturmiljø;
5) Kassér kultur eller steriliser med antibiotika, hvis kontaminering er årsagen.
2. Adskillige vigtige tilsætningsstoffer er almindeligt anvendt i cellekulturmedier og problemer, der bør være opmærksomme på i brugsprocessen
Phenolrød bruges som en indikator for pH i cellekulturmedier. Generelt kan mediets pH-værdi bedømmes ud fra indikatoreffekten af phenolrødt, men indholdet af phenolrødt i lavserum eller serumfrit celledyrkningsmedium er anderledes end i almindeligt cellekulturmedium og kan ikke observeres med blotte øjne eller pH-værdien bestemmes empirisk, og det anbefales at bruge et pH-meter til måling. Phenolrødt har normalt ikke en signifikant effekt på kvaliteten af biologiske produkter produceret i serumholdige cellekulturmedier og kan også fjernes ved oprensningsteknikker, men phenolrødt kan forårsage intracellulær natrium/kalium-ubalance i serumfri cellekulturmedier , som påvirker cellevækst.
cellekulturplade
Natriumbicarbonat bruges hovedsageligt som et buffersystem i cellekulturmediet og har også den virkning at regulere osmotisk tryk. Normalt er den anbefalede mængde natriumbicarbonat i produktets brugsanvisning en standard og sikker mængde, som opnås på baggrund af praktiske erfaringer på videnskabeligt grundlag. Men på grund af forskellige cellelinjer (stammer) kan den samme celle tilpasse sig forskellige miljøer (forskellige celletolerance osv.), og der er regionale forskelle i vandkvaliteten osv., som også kan ændres lidt i selve produktionen proces, men brugen af Dem, der skal lave de tilsvarende tests (fysisk-kemiske og celleproduktionstest osv.).
HEPES er en ikke-ionisk buffer med god bufferkapacitet i pH-området fra 7,2 til 7,4 og kan være toksisk for nogle celler ved høje koncentrationer. HEPES-buffer kan bruges med lave niveauer af natriumcarbonat (0,34g/L) for at udligne stigningen i osmotisk tryk forårsaget af tilsætning af yderligere HEPES. Dets sikre koncentrationsområde er 10 ~ 25 mmol/L.
Natriumpyruvat kan bruges som en alternativ kulstofkilde i cellekultur, og selvom celler foretrækker glucose som kulstofkilde, kan celler også metabolisere natriumpyruvat i fravær af glucose.
Glutamin er meget ustabil i opløsning. Det kan nedbrydes til 50 procent ved 4 grader i 1 uge. Det er bedst at forberede det separat under brug, opbevare det i et -20 graders køleskab og tilføje det til cellekulturmediet før brug.
