Celledyrkningsmediet skal indeholde tilstrækkelige næringsstoffer til at opfylde de stoffer og energi, der kræves til biokemiske reaktioner såsom nycellesyntese og cellemetabolisme. Hovedkomponenterne i cellekulturmediet er vand, aminosyrer, vitaminer, kulhydrater, uorganiske salte og andre hjælpenæringsstoffer. Derfor skal vi være opmærksomme på steriliseringsmetoden for cellekulturmedium og relaterede forholdsregler i daglige eksperimenter.
cellekultur
1. Steriliseringsmetoder og forholdsregler for forskellige cellekulturmedier
Steriliseringsmetoder for cellekulturmedium er opdelt i autoklavesterilisering og membranfiltreringssterilisering. Forskellige dyrkningsmedier kan have forskellige steriliseringsmetoder på grund af deres forskellige næringsstoffer.
Autoklav
Nogle medier, såsom MEM, kan autoklaveres, disse medier indeholder generelt ikke L-glutamin og natriumbicarbonat og tilsættes generelt efter at mediet er blevet autoklaveret. Desuden kan højtryksglutamat (såsom L-alanyl-L-glutamin) anvendes i stedet for L-glutamin. Det autoklaverbare medium er fuldt steriliseret med minimalt tab af næringsstoffer ved 121 grader, 15 psi og 15 minutter uden at forlænge steriliseringstiden.
De fleste cellekulturmedier er ikke egnede til autoklavering. Fordi dyrkningsmediet ofte indeholder vitaminer, proteiner, polypeptider, vækstfaktorer og andre stoffer, er disse stoffer tilbøjelige til denaturering eller funktionstab under høj temperatur eller strålingseksponering, så ovennævnte væsker filtreres og steriliseres for det meste for at fjerne bakterier. Der er mange filtermembraner tilgængelige til filtrering og sterilisering, og deres materialer er for det meste PES, nylon, polycarbonat, celluloseacetat, nitrocellulose, PTFE, keramik osv. Membranfiltreringssterilisering er en almindeligt anvendt og bekvem metode i øjeblikket. Filtermembraner med 0.2 μm porestørrelse bruges ofte, og nogle bruger 0.1 μm porestørrelse. Sammenlignet med højtryksfiltrering har membraner en levetid og er dyrere, men er mindre ødelæggende for næringsstofferne i cellekulturmediet.
2. Forholdsregler under opbevaring af forskellige cellekulturmedier
Generelt bør flydende celledyrkningsmedium ikke fryses ved -20 grad, da næringsstoffer kan udfældes under optøning, hvilket vil påvirke dyrkningseffekten. Under normale omstændigheder skal det opbevares ved 2 ~ 8 grader væk fra lys. Før brug tages det ud af køleskabet og stilles ved stuetemperatur for at opnå ligevægt. Det sædvanlige flydende medium er gyldigt i 6 til 12 måneder. Prøv at undgå langtidsopbevaring af flydende cellekulturmedium. Glutaminen i det vil nedbrydes langsomt med forlængelse af opbevaringstiden. Hvis cellevæksten ikke er god, kan du overveje at teste glutaminindholdet i mediet for at afgøre, om der skal tilsættes glutamin. . Kommercielt tilgængeligt flydende cellekulturmedium har en specifik udløbsdato. Efter at have brugt tørt pulvercellekulturmedium til at forberede væske, skal det også opbevares ved lav temperatur (2 ~ 8 grader). Ud over den lette nedbrydning af glutamin i mediet, kan andre komponenter i mediet også nedbrydes eller udfældes med stigende temperatur.
